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尊龙凯时:3T6-Swissalbino小鼠胚胎成纤维细胞培养处理方案

发布时间:2025-02-13   信息来源:尊龙凯时官方编辑

在处理3T6-Swissalbino小鼠胚胎成纤维细胞的培养过程中,遵循以下步骤能够确保细胞能够健康生长,从而为科学研究打下坚实基础。

尊龙凯时:3T6-Swissalbino小鼠胚胎成纤维细胞培养处理方案

细胞接收与初步检查

1)在收到细胞后,首先要检查培养瓶是否完好,注意确认是否有缝隙或裂痕。
2)使用显微镜观察细胞的生长状态,检查是否存在漂浮细胞。
3)对瓶口及瓶身进行新洁尔灭消毒,以确保无菌操作。

培养液的转移

4)打开瓶口后,再次用新洁尔灭对瓶口进行消毒,注意避免液体溢出并小心处理。然后用酒精灯对瓶口再次进行消毒。
5)将培养液小心转移至50ml离心管或广口瓶中。如果细胞漂浮现象严重,可选择离心处理,使用1000g的离心力离心5分钟,将上清液转移至另一个大离心管中,留下一些底部的细胞沉淀,轻轻吹打并回收至原培养瓶中。如果漂浮不严重,也可以进行短暂离心处理。
6)在原培养瓶中保留一部分原装培养液,然后补加新配制的培养基,调整至适当容积,例如4ml,以帮助细胞适应新环境。

细胞生长与冻存

当细胞长至70-80%时,大部分细胞应进行冻存,而部分细胞可用于传代操作。
7)在细胞适应新环境24-48小时后,再次使用显微镜观察其生长状态。如果细胞贴壁良好、形态饱满且无明显漂浮或死亡现象,则可进行下一个步骤。
8)在细胞传代时,首先轻轻摇晃培养瓶使贴壁细胞松动。接着用吸管轻轻吹打细胞,形成均匀的细胞悬液。按照1:3或1:4的比例,将细胞悬液分装至新的培养瓶中,并补充适量的新鲜培养基。
9)对于需要冻存的细胞,选择合适的冻存液(通常包含血清和DMSO等),将细胞悬液与冻存液按比例混合后,装入冻存管中。遵循慢冻原则,首先将冻存管置于4℃冰箱内30分钟,再转移至-20℃冰箱2小时,最后放入-80℃冰箱或液氮中进行长期保存。

培养过程中的注意事项

10)在整个培养过程中,定期更换培养基以维持细胞的营养供应和生长环境,同时注意保持无菌操作,避免细胞污染。通过以上细致的处理步骤,3T6-Swissalbino小鼠胚胎成纤维细胞能够在实验室中稳定生长,为科学研究提供了坚实的基础,确保符合尊龙凯时的高标准,促进生物医疗领域的进一步发展。